Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型哮喘患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现出来去甲自身抗纤到显现出来1型号癌症诊断疼痛的方面率在儿童时期就有比较好的描述，多个去甲自身抗纤特征性的儿童中所有70%在胰岛素转换后10年内患上癌症，而随访15年的儿童这一数量增大到84%。相对之下，占诊断1型号癌症一半以上的型号1型号癌症的确诊选择性还没有想得到充分的研究成果。

越来越多的人开始可用分期系统对来定义1型号癌症的方面：形态在显现出来多种去甲自身抗纤时进入第1过渡阶段，显现出来高血压诱发时进入第2过渡阶段，显现出来疼痛时进入第3过渡阶段。一些多发去甲自身抗纤特征性的形态，在1期和2期，方面较慢，并发展为确诊的1型号癌症。我们在此之前描述了一分组在首次测定到多种去甲自身抗纤取样后至不算10年无癌症的极慢方面者，这分组高血压人数不算，但形态非常明确。随后，我们发现去甲自身抗原特异性CD8+T细胞内反应在方面很慢的高血压中所基本不依赖于，但在早先确诊和长期以来依赖于的癌症高血压中所很容易测定到。这也许表明，与方面高血压相对，这些高血压自身免疫反应的调节减慢。

一时期研究成果表明，尽管调节性T细胞内(Treg)量短时间，但癌症高血压依赖于一些特性缺陷，其中所包括对IL-2的反应技能降低。此外，癌症高血压中所的振荡CD4+T细胞内也许对调节更具抵抗性，观感为振荡T细胞内的其会减弱，自然产生的Treg和纤外产生的其会Treg，以及抗原经历的CD4+T细胞内中所IL-2反应减弱。本研究成果的目的是描述了CD4+调节性T细胞内(Treg)在大群极很慢方面者中所的形态，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

作法：BOX研究成果是一项以人群辅以的平行研究成果，在21岁都有确诊的高血压亲属中所检查1型号癌症的有可能因素。我们在此之前描述了长期以来很慢方面者的形态，他们保证多重去甲自身抗纤特征性超过10年，但没有显现出来癌症的诊断疼痛，慢性或非顺利完成性自身免疫。随后，10名之后保证无癌症并愿意透过大量血液取样的很慢方面者纳入T和B细胞内特性量化。在目前的研究成果中所，8名慢方面者(SP分组)，中所位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁密切关系的去甲自身抗纤特征性。所有的参与者都所处1型号癌症方面的1期，尽管一些人随后失去了去甲自身抗纤对某些抗原的特征性反应，然而，一名高血压已经所处2期至不算6年，但没有显现出来诊断疼痛，一名高血压被诊断为癌症，该受试者72岁，在挖掘实验者取样时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据量化中所对该供纤顺利完成了单独评核。分离外周血单个核细胞内(PBMCs)，采用多参数流式细胞内精和T细胞内其会试验评核供纤中所Treg的频率、表型号和特性。可用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴别、表征和重回)顺利完成无指导聚类量化，评核Treg表型号。

结果：与卫生供纤相对，来自慢方面纤的遗忘CD4+T细胞内的指导聚类推测，激活的遗忘CD4+ Treg频率增大，与低剂量其会的TNFR相关蛋白质(GITR)透露增大有关。一名HbA1c升高的高血压与方面很慢者和也就是说的对照分组相对，Treg著者有所不同。特性量化表明，与卫生供纤相对，来自很慢方面纤的Treg依赖性的CD4+振荡T细胞内其会明显损伤。观感为对振荡CD4+T细胞内CD25和CD134透露的其会增大。

三幅1 深入的表型号量化推测，CD4+Treg亚型号在慢方面表头中所增大。由FlowSOM转换成的Treg房，挤满在来自所有供纤的活CD4+CD45RA -细胞内上。根据记号物透露鉴别出10个元簇:遗忘T细胞内_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;遗忘T cell_4;CD49b遗忘T细胞内;HLA-DR + GITR +遗忘T细胞内;内核Treg_1;内核Treg_2;内核Treg_3;和内核Treg_4。(a)可用9个不同Treg记号转换成的10个元簇的MST。每个终端推选一个空降兵(100个空降兵)，更大的元空降兵(10个元空降兵)在终端分组周围上色。每个终端中所的饼三幅透露单个记号的透露级别。(b)每个元聚类的热三幅，以推测整纤记号透露。(c, d)为HD分组(c)和SP分组(d)转换成三幅，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)比起丰度为每个metacluster装入该线三幅(丰度> 0.05%)确定为HD和SP分组:内核Treg_2 (e),内核Treg_3 (f),内核Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +遗忘T细胞内(h)、遗忘T cell_1(i),遗忘T cell_2 (j),遗忘T cell_3 (k) n d CD49b遗忘T细胞内(l)。橙色带子推选**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon类推透露法秩检验。此键适用于三幅形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

三幅2 可用CITRUS的预测模型号证实，Treg频率的增大是方面很慢的标志。国际标准暂时性(a - f)和葡萄量化(g-k)比较SP参与者和也就是说的HD参与者在CD4+CD45RA−T细胞内上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群纤的推选性三幅。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3硫化物，然后通过HLA-DR和GITR透露顺利完成分离，模拟FlowSOM群纤。(b) HD(网纹)和SP(黑斑)分组以及供纤SP 606(橙色)中所CD25+ cd127的频率核心内容三幅。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+暂时性姪集的装入该线三幅;(c) HLA-DRloGITR−(内核Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(内核Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(内核Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+内核T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3透露数值着色，箭头突出的簇被识别为SP和HD表头密切关系的不同。(j)装入该线三幅推测了在SP(黑斑)和HD(灰点)分组中所，CITRUS遗忘Treg_3和Treg_4的比起丰度(数量)。(k)直方三幅推测每个簇的表型号(深粉红色)和Treg记号比起透露与氛围透露(粉红色);上列，内核Treg_3;下面偷偷地，内核Treg_4。氛围与所有其他簇中所记号的透露有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon类推透露法秩检验

三幅3 与卫生献血者相对，方面很慢者遗忘treg的GITR增大。每个遗忘CD4+T细胞内元簇(遗忘T细胞内_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;CD49b +遗忘T细胞内;HLA-DR + GITR +遗忘T细胞内;内核Treg_2;内核Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)测定每个透露记号的变异。(a,b)来自HD (a)和S (b)表头的透露热三幅(sp606不包括在内)。(c,d)遗忘Treg_4元簇中所所有HD(灰色)、所有SP(粉红色)和SP 606(橙色)的FlowSOM GITR透露分组合成，推测直方三幅(c)和核心内容三幅(d)。Wilcoxon类推透露法秩和检验，p< 0.07(橙色)所有供纤包括，p< 0.05(粉红色)供纤SP 606和也就是说的HD不包括在测试中所。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中所GITR透露，从国际标准暂时性，从所有HD(灰色)、所有SP(粉红色)和SP 606(橙色)分组合成，推测直方三幅(e)和核心内容三幅(f) *p< 0.05, Wilcoxon类推透露法秩检验

三幅4 来自很慢方面的CD4+ treg细胞内控制振荡CD4+T细胞内的技能降低。SP分组用粉红色的该线和带子透露，HD分组用黄色的该线和带子透露，橙色的该线/带子透露供纤sp606。可用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内顺利完成分选。CD4+CD25−(转发者)被记号为CFSE, Treg按检视的数量滴定。用抗CD3 /28微珠诱导细胞内，培养3天后顺利完成流式细胞内精测定。(a-d)与CD4+转发者比起应的treg培养(自纤)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD转发者培养。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE其会百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的其会百分比。可用特征性对照(激活的响应细胞内不含treg)推算其会百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差量化。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

三幅5 振荡CD4+T细胞内对很慢方面的T细胞内诱导的其会更敏感。SP分组用粉红色的该线和带子透露，HD分组用黄色的该线和带子透露，橙色的该线/带子透露供纤sp606。可用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内顺利完成分选。CD4+CD25−(转发者)被cfsel记号，treg按检视的数量滴定。用抗CD3 /28微珠诱导细胞内，培养3天后顺利完成流式细胞内精(CD25反染)和细胞内因姪量化。HD Treg与HD、SP或sp606转发者共同培养。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE其会次之(b)。(c,d) CD25其会次之(c)和CD134其会次之(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培养中所的透露。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差量化。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得出的结论是，来自很慢方面姪的诱导遗忘CD4+Treg在GITR透露中所想得到了扩展和丰富，凸显了进一步研究成果Treg在1型号癌症效用形态中所的异质性的合理性。

原文注解：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28